一、定義與特點
“適用于流式細胞術(shù)”的試劑是指圍繞流式染色與檢測流程開發(fā)并驗證的配方體系，覆蓋染色/洗滌緩沖、Fc阻斷與背景抑制、存活染料、熒光抗體/化學(xué)探針、固定/透化試劑、單色補償與性能質(zhì)控微球等。核心特點是：
· 熒光信號穩(wěn)定：低自發(fā)熒光、低光漂白、標(biāo)記度（D/P）合理，強度線性可重復(fù)。
· 低非特異與高相容：Fc受體阻斷、溫和表活與蛋白穩(wěn)定組分降低背景；與常見激光線/濾光片組兼容。
· 生物學(xué)安全與活性維持：低內(nèi)毒素、無菌，維持細胞活率和形態(tài)；固定/通透流程兼容。
二、關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQAs）
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質(zhì)量屬性
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技術(shù)意義
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檢測/驗證方法
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熒光純度與光譜匹配
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確保通道分離清晰、補償可解耦
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光譜掃描；通道MFI與溢出矩陣評估
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標(biāo)記度（D/P）與活性
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平衡信號強度與抗原親和力
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UV-Vis計算D/P；抗原結(jié)合曲線對比
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信噪比（S/N）
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反映靈敏度與背景水平
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陽/陰群MFI比；同型/去抗原對照
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批次一致性
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門控與定量的跨批可重復(fù)性
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新舊批并行；ΔMFI、CV與補償矩陣差異
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非特異結(jié)合
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減少偽陽與閾值漂移
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Fc Block前后比較；同型對照背景率
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光穩(wěn)定性
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上機期間信號保持
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持續(xù)曝光衰減測試；時間序列MFI
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細胞相容性/活率
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避免染色過程損傷細胞
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PI/7-AAD/固定可染活力染劑檢測
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緩沖體系穩(wěn)定性
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pH/離子/蛋白濃度恒定，降低吸附
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pH、電導(dǎo)、蛋白定量；長期在用觀察
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無菌與內(nèi)毒素
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防止細胞刺激與假陽性
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平板培養(yǎng)；LAL法（必要時）
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固定/通透兼容性
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保持表位可識別與熒光穩(wěn)定
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不同固定/通透條件下的信號恢復(fù)度
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三、適用范圍
1.免疫細胞分型與表型分析
鑒定淋巴細胞、單核細胞、樹突細胞等亞群的表面標(biāo)志物（CD分子）表達。
2.功能檢測
細胞增殖（CFSE、Ki-67）、活性氧（DCFH-DA）、細胞凋亡（Annexin V/PI）、細胞周期等。
3.信號通路與胞內(nèi)抗原檢測
通透后檢測磷酸化蛋白、轉(zhuǎn)錄因子（pSTAT、NF-κB）等。
4.藥物篩選與免疫反應(yīng)監(jiān)測
用于藥物效應(yīng)評估、免疫治療監(jiān)控（CAR-T、免疫檢查點）、疫苗免疫應(yīng)答分析。
5.質(zhì)量控制與生產(chǎn)監(jiān)測
細胞制備、培養(yǎng)及流式質(zhì)控樣的純度與活率檢測。
四、主要組成與功能定位
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類別
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常用試劑/配方
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功能說明
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緩沖體系
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PBS、HBSS、FACS buffer（PBS+1–2%BSA；0.05–0.1%NaN?僅用于固定/分析樣本，活細胞/分選禁用）
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保持滲透壓、減少非特異結(jié)合（活細胞用無疊氮配方）
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核染劑
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DAPI、PI、7-AAD、Hoechst
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細胞活性與細胞周期分析
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固定/通透劑
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多聚甲醛、皂苷、Triton X-100
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固定形態(tài)或通透膜以染色胞內(nèi)抗原
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洗滌與稀釋液
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FACS buffer/PBS
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去除游離抗體與背景熒光
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五、常見問題與解決方案
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問題
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可能原因
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解決策略
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信號弱
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染料光漂、標(biāo)記密度低、抗原表達弱
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使用高亮度染料、增加孵育濃度或延長時間
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背景高
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非特異吸附、死細胞過多
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增加Fc Block、去死細胞、優(yōu)化洗滌步驟
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光譜溢出
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染料通道重疊、補償矩陣不準(zhǔn)
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重設(shè)補償珠，選擇光譜分離度更好的組合
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熒光漂白
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強光暴露或未加抗光漂劑
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避光操作、縮短上機時間、添加防漂劑
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細胞聚團
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緩沖液中Ca²?/Mg²?過高或溫度不穩(wěn)
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使用無鈣/鎂PBS、控制溫度4–8°C
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批次差異
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抗體或染料批變更
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新舊批平行驗證，更新補償與門控參數(shù)
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六、常見問答
Q1：染色后信號太弱，陽性群難區(qū)分？
A：檢查抗體稀釋比例與孵育時間是否過短；確認樣品中靶抗原表達量是否低；可嘗試延長孵育（30→45 min），在4°C避光下操作，并確保洗滌緩沖中含1%BSA以防抗體吸附損失。
Q2：固定后熒光明顯下降？
A：部分染料對醛固定敏感（尤以串聯(lián)染料如PE-Cy5/PE-Cy7）；FITC/APC多數(shù)可耐受溫和固定。優(yōu)先選固定兼容或可固定活性染料
Q3：死細胞比例高、群體聚集？
A：染色前保證細胞健康度（>90%）；使用不含鈣鎂的PBS降低黏附；加入DNAse I（50 µg/mL）可減少聚團；上機前過濾樣品，確保顆粒分散。
七、使用規(guī)范與儲存建議
· 儲存條件：2–8°C避光密封；凍融會導(dǎo)致染料失活或蛋白聚集。
· 操作前準(zhǔn)備：抗體輕輕混勻后使用，不可劇烈振蕩；樣品與緩沖液溫度一致。
· 避光與時效：熒光抗體配制后應(yīng)立即上機檢測；延時不超過2小時。
· 洗滌與稀釋：推薦FACS buffer（PBS+1%BSA；0.05–0.1%NaN?僅限固定/分析樣本，活細胞/分選禁用），維持低背景。
· 儀器標(biāo)準(zhǔn)化：每日以校準(zhǔn)微球檢查激光強度、光譜響應(yīng)和補償系數(shù)。
八、阿拉丁產(chǎn)品優(yōu)勢
1.高純度熒光標(biāo)記與嚴格光譜驗證
熒光抗體均經(jīng)單峰發(fā)射驗證，并提供激發(fā)/發(fā)射參數(shù)，確保通道補償精確。
2.低背景配方優(yōu)化
內(nèi)含溫和表活與Fc阻斷組分，顯著降低單核細胞、巨噬細胞類的非特異結(jié)合信號，適配復(fù)雜樣品。
3.批次穩(wěn)定與跨平臺兼容
每批均進行ΔMFI、補償矩陣與多平臺比對（BD、Beckman、Sony），支持長周期面板使用。
4.高生物安全與無菌控制
采用0.22 µm過濾與低內(nèi)毒工藝，兼容原代細胞、免疫細胞制備及臨床前體系。
5.光穩(wěn)定增強與長期保存
含抗光漂劑與蛋白保護體系，可在多次采樣過程中維持信號強度穩(wěn)定，降低長期上機漂移。
6.完整的驗證與文件支持
每個產(chǎn)品提供COA、光譜圖、批間比對數(shù)據(jù)與推薦補償矩陣，符合科研及藥物研發(fā)文檔化要求。
九、同類相似級別對比
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維度
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流式細胞術(shù)級（Flow Cytometry）
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免疫組織化學(xué)級（IHC）
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免疫分析級（ELISA/CLIA）
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檢測對象與讀出
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懸浮細胞單體，多參數(shù)熒光強度（MFI）、群體比例
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組織切片定位，顯色/熒光圖像、評分
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溶液相/固相信號，吸光度/發(fā)光讀數(shù)
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關(guān)鍵配方關(guān)注
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熒光純度、補償相容、低非特異、活率維持
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抗原修復(fù)、封閉與顯色動力學(xué)、低背景
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低本底、高S/N、線性與平臺期穩(wěn)定
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試劑核心
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熒光抗體、FACS緩沖、Fc Block、控制珠
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修復(fù)液、封閉劑、聚合物二抗、底物
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標(biāo)記抗體/抗原、底物體系（TMB/ECL）
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典型質(zhì)控
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補償微球、強度標(biāo)準(zhǔn)珠、同型對照
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陽/陰對照片、顯色曲線、形態(tài)評估
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陰/陽/空白對照、標(biāo)準(zhǔn)曲線（R²）
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常見風(fēng)險
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光譜溢出、光漂、非特異、批次漂移
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過修復(fù)/欠修復(fù)、脫片、邊緣加深
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自發(fā)色/自發(fā)光、基質(zhì)效應(yīng)、批次漂移
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方法轉(zhuǎn)移難點
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面板設(shè)計與補償矩陣復(fù)用
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修復(fù)窗口與顯色時間重現(xiàn)
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標(biāo)準(zhǔn)線性與鉗位誤差控制
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結(jié)果形態(tài)
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單細胞分布與門控圖
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圖像定位與強度評分
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曲線/終點讀數(shù)（OD、RLU）
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適用于流式細胞術(shù)（Flow Cytometry）的試劑，不僅要求化學(xué)純度高，更強調(diào)光譜精確、信號穩(wěn)定與實驗可重復(fù)性。阿拉丁通過嚴格的熒光標(biāo)記控制、跨平臺性能驗證及低背景配方優(yōu)化，使每一次細胞分析都具備高分辨率與數(shù)據(jù)一致性。