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UHPLC–MS級(jí)溶劑實(shí)用指南

2025/12/4 15:56:23  作者:阿拉丁


 

“適用于UHPLC-MS(for UHPLC-MS)”是什么意思

這些溶劑/試劑是專(zhuān)為配合質(zhì)譜(MS)檢測(cè)的超高效液相色譜(UHPLC;< 2µm填料、高壓力)而生產(chǎn)并通過(guò)相應(yīng)QC測(cè)試的。其具有極低的非揮發(fā)殘留、ppb級(jí)金屬雜質(zhì)、極低的UV/MS本底以及亞微米級(jí)微粒控制,因此即使在痕量水平也能保持色譜柱和離子源的清潔與靈敏。

隨著LC色譜柱粒徑縮?。?lt; 2µm)且系統(tǒng)壓力升高(UHPLC系統(tǒng)可運(yùn)行至約1,000 bar(≈15,000psi)),溶劑潔凈度與顆??刂频闹匾燥@著提升;與此同時(shí),MS離子源對(duì)低離子/有機(jī)污染的要求愈發(fā)嚴(yán)格。各供應(yīng)商據(jù)此推出了面向LC-MS且與UHPLC兼容的專(zhuān)用等級(jí),并在純化、質(zhì)量控制(QC)和包裝環(huán)節(jié)增加了工序。由于沒(méi)有統(tǒng)一的外部標(biāo)準(zhǔn),“LC-MS/UHPLC-MS等級(jí)”由供應(yīng)商自行界定——請(qǐng)務(wù)必查閱批次COA(分析證書(shū))。

UHPLC–MS工作流程對(duì)污染極其敏感。微量的非揮發(fā)殘留、堿金屬(Na?/K?)、增塑劑或微粒都可能抑制電離、提高化學(xué)噪聲、產(chǎn)生加合物,甚至堵塞濾片/色譜柱(frits/columns)。標(biāo)注“適用于UHPLC–MS”的產(chǎn)品通過(guò)以下措施針對(duì)性降低這些風(fēng)險(xiǎn):(a)更嚴(yán)格的雜質(zhì)限度,(b)亞微米級(jí)末端過(guò)濾/潔凈包裝,以及(c)與方法相關(guān)的適用性測(cè)試(梯度PDA〔二極管陣列〕、LC–MS本底)。

“適用于UHPLC–MS”相較普通等級(jí)的獨(dú)特之處:

  • 雙重調(diào)校:同時(shí)滿(mǎn)足:(1)UHPLC的機(jī)械要求(小粒徑/高壓力)與 (2) MS的化學(xué)要求(有利電離、超低離子/有機(jī)本底)。
  • 結(jié)果收益:更高的靈敏度、更潔凈的譜圖、更長(zhǎng)的色譜柱/離子源壽命,以及在痕量水平下更佳的基線(xiàn)重現(xiàn)性。

在COA上常見(jiàn)的QC/實(shí)驗(yàn)室測(cè)試項(xiàng)目

具體限度因供應(yīng)商與溶劑而異,但常見(jiàn)測(cè)試包括:

  • MS本底(ESI±)——TIC(總離子流)/背景離子低→痕量水平譜圖更干凈
  • 痕量金屬(ICP-MS)——ppb級(jí)Na?/K?/過(guò)渡金屬→更少加合物、更高靈敏度
  • 蒸發(fā)殘留——mg/L級(jí)低殘留→降低離子源結(jié)垢
  • UV/梯度基線(xiàn)(200–400nm)——PDA基線(xiàn)平滑→確保UHPLC梯度穩(wěn)定
  • 水分(KF)、含量(assay)、酸度/堿度——組成控制
  • 微粒與末端過(guò)濾(0.1–0.2µm——保護(hù)< 2µm色譜柱
  • 包裝/內(nèi)襯——低析出瓶蓋、惰性氣體覆蓋。

阿拉丁具體產(chǎn)品示例

  • 乙腈(Acetonitrile)——適用于UHPLC,適合MS:低黏度、低背壓;已進(jìn)行MS本底篩查;末端亞微米過(guò)濾。小分子ESI?方法的優(yōu)選默認(rèn)溶劑。
  • 甲酸銨(Ammonium formate)——適用于LC–MS:適用于正/負(fù)兩種離子模式的揮發(fā)性緩沖鹽。
  • 氨水(Ammonia solution,25%水溶液)——適用于LC–MS:負(fù)離子模式/高pH方法用的揮發(fā)性堿;注意色譜柱pH限度與材料相容性。
  • 水(Water)——適用于UHPLC,適合MS:低TIC;< 0.2µm過(guò)濾;通過(guò)梯度測(cè)試。穩(wěn)定MS基線(xiàn)的關(guān)鍵組成。
  • 甲醇(Methanol)——適用于UHPLC,適合MS:與ACN選擇性不同;嚴(yán)格微??刂啤_m用于酚類(lèi)化合物及部分ESI?工作流。

與相關(guān)等級(jí)的比較

等級(jí)

主要目的

典型新增測(cè)試/特性

適用場(chǎng)景

HPLC grade

低UV/熒光本底,通用色譜

UV截止/透過(guò)率,低殘留

采用UV/FLD的HPLC(無(wú)MS);日常/常規(guī)工作

HPLC Gradient grade / UHPLC (UV)

在梯度與小粒徑色譜柱上獲得平滑基線(xiàn)

梯度基線(xiàn)測(cè)試;精細(xì)過(guò)濾

使用光學(xué)檢測(cè)器的快速梯度HPLC/UHPLC

LC-MS grade

面向質(zhì)譜的靈敏度與潔凈度

MS本底測(cè)試;ppb級(jí)金屬;低殘留

在標(biāo)準(zhǔn)HPLC或UHPLC上進(jìn)行LC-MS(/MS)

UHPLC-MS grade

同時(shí)滿(mǎn)足UHPLC的機(jī)械需求與MS的化學(xué)需求

在LC-MS測(cè)試基礎(chǔ)上,增加更嚴(yán)的顆粒/梯度規(guī)范與UHPLC適用性

< 2µm柱 + MS檢測(cè)的最佳選擇

 

選型要點(diǎn)與注意事項(xiàng)

1. 檢測(cè)器決定等級(jí):若終端檢測(cè)為MS,請(qǐng)選擇LC-MS或UHPLC-MS等級(jí)。HPLC級(jí)可用于僅UV的方法,但在MS上可能提高噪聲或產(chǎn)生加合物。

2. 使用揮發(fā)性添加劑:優(yōu)選甲酸/乙酸甲酸銨/乙酸銨;在LC-MS中避免使用磷酸鹽/硼酸鹽/Tris——它們會(huì)抬高本底、抑制信號(hào)并污染離子源。

3. 謹(jǐn)慎使用TFATFA在僅UV的工作流程中有助于峰形,但會(huì)抑制電噴霧電離(ESI)信號(hào);若MS靈敏度重要,請(qǐng)改用FA(甲酸)或采取緩解策略。

4. 系統(tǒng)整體匹配:LC-MS級(jí)水與有機(jī)相同等重要;管路、瓶蓋與樣品瓶應(yīng)選用低析出規(guī)格(配PTFE襯墊)以減少浸出物。。

5. 不要指望“混合提升”:不同等級(jí)混合后,潔凈度只會(huì)等同于最差的那一組分。

6. 儲(chǔ)存與操作:保持嚴(yán)密密封,盡量減小頭空間,并使用潔凈的玻璃流路;自配混合溶劑須0.2 預(yù)過(guò)濾,必要時(shí)脫氣。

常見(jiàn)問(wèn)答(FAQs)

問(wèn):我能在普通HPLC上使用UHPLC–MS 等級(jí)溶劑嗎?

答:可以——該等級(jí)向下兼容。這不會(huì)損害系統(tǒng);但若僅做UV檢測(cè),你可能為并不需要的性能多付成本。

問(wèn):“LC–MS級(jí)”在各品牌間是否有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)?

答:沒(méi)有全球統(tǒng)一規(guī)范;各供應(yīng)商會(huì)自定合格標(biāo)準(zhǔn)(如金屬項(xiàng)目、MS本底、殘留限度等)。請(qǐng)以所用批次的COA為準(zhǔn)。

問(wèn):為何用“MS級(jí)”溶劑做UHPLC–UV仍會(huì)出現(xiàn)基線(xiàn)起伏/鬼峰?

答:“MS級(jí)”更強(qiáng)調(diào)電離潔凈度;若要獲得梯度UV的平滑基線(xiàn),請(qǐng)確認(rèn)該批次通過(guò)梯度/PDA測(cè)試,或改用專(zhuān)門(mén)的梯度/UHPLC等級(jí)溶劑。

問(wèn):做肽類(lèi)LC–MS 應(yīng)選哪種酸?

答:優(yōu)先嘗試甲酸(FA)或甲酸銨TFA可改善峰形,但會(huì)抑制ESI靈敏度;僅在必要時(shí)、并配合緩解策略(如柱后補(bǔ)加/“去抑制”處理)使用。

問(wèn):金屬雜質(zhì)真的重要嗎?

答:重要——ppb級(jí)堿金屬/過(guò)渡金屬會(huì)導(dǎo)致加合物并降低靈敏度;請(qǐng)選擇具有ppb級(jí)ICP-MS金屬指標(biāo)且MS本底干凈的批次。

為什么在UHPLC-MS工作中選擇阿拉丁

阿拉丁面向UHPLC–MS的溶劑/添加劑除通過(guò)MS本底與ppb級(jí)金屬的QC外,還完成梯度/UHPLC適用性核驗(yàn)。配套的批次COA與幫助中心指引,方便按方法選擇合適等級(jí),并對(duì)合規(guī)或已驗(yàn)證的流程形成完備的文檔化佐證。

 

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